植物病理学与微生物学杂志

抽象的

一种简单有效的提取S. Rolfsii DNA 的方法，可用于基于 PCR 的多样性研究

男 AS、加藤 F 和 Mukankusi CM

目前从 Sclerotium rolfsii 中提取 DNA 的方法使用大量有害有机化学品来提取高质量 DNA。DNA 的提取因与 DNA 结合而变得粘稠的胞外多糖而变得更加复杂。我们开发了一种简单有效的从 S. rolfsii 中提取高质量 DNA 的方案。我们的方法使用含有十二烷基硫酸钠和蛋白酶 K 的 DNA 提取缓冲液来灭活蛋白质，并使用高盐浓度来沉淀胞外多糖。在 DNA 提取过程中，它既不使用苯酚、氯仿也不使用异戊醇。它也不需要冷冻干燥菌丝体并使用液氮研磨。使用我们的方法，从 100 毫克菌丝体中获得了足够量的纯（平均 A260：A280=1.91 ± 0.001）DNA（平均值 = 55.57 ± 0.002 ng/µl）。使用简单序列重复引物和针对 S. rolfsii 内部转录间隔区的引物，DNA 可进行 PCR 扩增。我们的方法对于无法使用液氮和冷冻干燥设施的实验室非常有用，并且将成为基于 PCR 的这种常见豆类病原体系统发育研究的催化剂。