微生物与生化技术杂志

抽象的

逆转录和多酶限制性片段长度多态性分析相结合快速检测大肠杆菌

细田昭文、驹场新、岸本满和田村宏人

培养法用于监测食品中的致病微生物。然而，目前的方法需要几天时间才能产生结果，而且产品通常在微生物分析结果出来之前就已上市销售。我们使用接种了大肠杆菌 K-12 和 O157:H7 (GTC 14536) (0 CFU/g 和 1×101–104 CFU/g) 的模拟食品样品开发了一种 RNA 提取和微生物检测系统。在提取 RNA 之前，将活细胞或死细胞接种到食品样品中，将样品均质化，并使用提取的 RNA 使用随机 6 聚体合成 cDNA。使用 PCR 分析目标基因，并使用两种限制性酶 (HhaI 和 HaeIII) 消化 PCR 产物以分析限制性片段长度多态性 (RFLP)。PCR 证实了高达 1×101 CFU/g 活细胞样品的 RNA 提取和 cDNA 合成。多酶限制性片段长度多态性 (MeRFLP) 表明获得的 DNA 片段大小与理论片段大小一致，表明逆转录-MeRFLP (RT-MeRFLP) 可以识别目标细菌。这些结果表明，RT-MeRFLP 不需要培养，可以在 6.5 小时内完成，是一种低成本、快速、可靠的食品中细菌识别系统，很有前途。