微生物与生化技术杂志

抽象的

两种胡萝卜软腐欧文氏菌 L-天冬酰胺酶 II 构建体的比较：克隆、异源表达、纯化和动力学表征

Priscila Lamb Wink、Heique Marlis Bogdawa、Gaby Renard、Jocelei Maria Chies、Luiz Augusto Basso 和 Diógenes Santiago Santos

尽管胡萝卜软腐菌产生的 L-天冬酰胺酶 II 的谷氨酰胺酶活性低于目前用于治疗儿童急性淋巴细胞白血病的大肠杆菌和菊欧文氏菌的L-天冬酰胺酶 II，但它可能成为治疗儿童急性淋巴细胞白血病的重要替代疗法。本文我们描述了胡萝卜软腐菌 L-天冬酰胺酶 II 的克隆、表达、纯化和稳态动力学参数的测定：含信号肽 (AspSP) 和不含信号肽 (AspMP)。通过一步法纯化 AspMP 至均质，产率为 91%，通过两步法纯化 AspSP，产率为 28%。此外，这两种酶都表现出相似的高比活：分别为 208.1 和 237.6 U mg ^-1。Km 和 k _cat值表明 AspMP 的谷氨酰胺酶活性低于 AspSP。此外，AspMP 的生产采用更简单的纯化方案，产量更高。该工艺可实现大规模生产，并引起研究人员和生物制药公司的兴趣