药物分析学报

抽象的

CTP：磷酸胆碱胞苷转移酶α（CCTα）siRNA诱导肺癌细胞死亡

露琪亚·马里贾尼 (Rukia Marijani) 和巴拉克·O·阿博尼奥 (Barack O. Abonyo)

CTP：胆碱胞苷酰转移酶 (CCT) 是一种限速酶，通过 CDP-胆碱途径合成磷脂酰胆碱 (PC) 必不可少，而磷脂酰胆碱途径对细胞增殖至关重要。有条件缺乏 CCT? 活性的细胞会因凋亡而死亡。使用当前的分子技术抑制癌细胞中的 CCT? 表达或活性将提供一种极好的无毒癌细胞杀灭机制。本研究的目的是通过研究 CCT? siRNA 序列诱导肺癌细胞死亡的能力来调查将其用作抗癌剂的可能性。p53 阳性 A549 和阴性 H1299 肺上皮细胞系用不同浓度 (0-800 nM) 的 CCT? siRNA 序列 (A、B 和 C) 和乱序 siRNA (siRNA S) 作为对照转染 24 小时。抑制 CCT?通过Western印迹分析检测不同siRNA的表达情况。使用Olympus显微镜观察CCT?敲低对细胞结构和形态的影响，同时通过Cell Titer Blue (CTB)和乳糖脱氢酶(LDH)测定分析CCT? siRNA在细胞毒性和存活中的作用。所有CCT? siRNA序列均显著抑制CCT?蛋白表达。显微镜拍摄的图片显示未经处理和siRNA S处理的细胞完整且具有可见的细胞核，而CCT?-siRNA转染的细胞收缩，细胞核含有类似于凋亡小体的深色颗粒结构。在较高的CCT?-siRNA浓度下，细胞膜完全降解，显示出细胞裂解的迹象。CTB测定显示未经处理的细胞表现出高荧光强度，表明存在更多活细胞，随着CCT?-siRNA浓度的增加，荧光强度降低。LDH测定显示CCT?-siRNA转染的细胞表现出比未经处理的细胞更高的吸光度，反映死细胞。两项检测都表明，siRNA S 处理的细胞表现出与未处理的细胞相似的结果，表明细胞死亡是 CCTasiRNA 抑制所特有的。此外，添加 PC 并没有提高 CCT?-siRNA 处理细胞的活力。这些结果表明 CCT?-siRNA 敲除 CCT? 蛋白导致细胞死亡，这意味着这些序列可以用作抗癌剂。