植物病理学与微生物学杂志

抽象的

番茄尖镰孢菌环介导等温扩增技术快速检测的建立及应用

穆罕默德·阿明·阿尔马西、赛义德·穆罕默德·侯赛尼·德哈巴迪、阿布巴克尔·莫拉迪、扎赫拉·埃夫特卡里、迈赫迪·阿格哈普尔·奥贾格坎迪和萨伊德·阿格哈伊

首次开发了一种利用比色环介导等温扩增 (LAMP) 技术检测番茄尖镰孢菌的可靠快速病原体检测方案。为此，所有六种 LAMP 引物（即 F3、B3、FIP、BIP、LF 和 LB）以及 PCR 引物（F 和 R）都是基于真菌基因组的 28s 核糖体 RNA 基因（GenBank 登录号：HM057281.1）设计的。尽管 PCR 和 LAMP 检测都可以成功检测出阳性感染样本，但考虑到时间、安全性、成本和简单性，后者总体上更胜一筹。此外，结果表明，与 PCR 相比，LAMP 检测的灵敏度提高了 100 倍，速度提高了 4 倍。有趣的是，LAMP 反应无需 DNA 纯化（直接 LAMP）即可成功检测番茄尖镰孢菌。同时，在用于检测 LAMP 产物的六种可视染料中，羟基萘酚蓝、GeneFinderTM 和 SYBR Green I 可以在密闭试管方法中产生长时间稳定的颜色变化和亮度，从而防止交叉污染风险。总之，由于 LAMP 灵敏度高、成本低、相当用户友好，并且可以产生比以前的诊断程序（例如血清学方法、PCR 和其他分子方法）更准确的结果，因此我们建议将这种比色测定法作为高度可靠的替代真菌识别系统，用于识别番茄尖镰孢菌，以及可能的其他真菌疾病。