药物分析学报

抽象的

开发一种快速且经济有效的检测方法，用于使用重组蛋白同时筛选可逆性细胞色素 P450 抑制和 CYP3A4 代谢依赖性抑制

Serenella Zambon、Stefano Fontana、Raffaele Longhi 和 Mahmud Kajbaf

在本研究中，我们开发了一种高质量、快速且经济高效的 CYP450 抑制检测方法，该方法能够检测可逆性和 CYP3A4 代谢依赖性抑制 (MDI)，使用重组表达的 P450 异构体和荧光 P450 底物。使用二乙氧基荧光素 (DEF) 作为探针底物筛选 CYP3A4 异构体。然后可以根据 10 分钟内测量的探针底物的代谢率计算测试化合物对 CYP3A4 异构体的 IC50 值。此外，通过将二乙氧基荧光素代谢率的测定延长 30 分钟并在孵育期内每 5 分钟计算一次 IC50 值来确定测试化合物的 CYP3A4 代谢依赖性抑制潜力。可以通过比较 10 分钟和 30 分钟孵育后测量的 IC50 值来确定测试化合物的 CYP3A4 代谢依赖性抑制潜力的估计值。孵育使用选择性 CYP 抑制剂咪康唑（用于直接 P450 抑制）和醋竹霉素（用于代谢依赖性抑制）作为阳性对照。整个筛选过程采用 96 孔板格式完全自动化，使用汉密尔顿液体处理机器人技术，结合两个荧光计（Tecan）和定制实验室信息管理。该检测目前用于在先导优化过程的早期筛选化合物，并识别那些导致可逆和/或基于代谢的 CYP450 抑制的化合物，从而开发具有最低 DDI 潜力的分子或化学系列。通过此检测生成的大量数据还可用于构建信息数据库并改进预测模型。