植物病理学与微生物学杂志

抽象的

开发基于分子的方法，用于特异性检测菲律宾造成番茄卷叶病的豇豆花叶病毒种

杰里米·罗伊·奥古斯塔斯·戈麦斯 *

番茄因其经济和营养价值而成为最重要的蔬菜作物之一，但由于一种由贝各摩病毒引起的疾病，番茄产量多年来一直下降。引起番茄黄化卷叶病或番茄卷叶病的贝各摩病毒影响着世界许多热带和亚热带地区的番茄生产。这些植物病毒的检测有限，使得它们很难检测和控制。该研究旨在开发基于分子的 ToLCPV 和 ToLCCeV 特异性检测方法。方法如下：1) 使用多序列比对验证已发表的引物是否能与特定的贝各摩病毒种类退火，2) 设计用于特异性检测 ToLCPV 或 ToLCCeV 的引物并通过 PCR 进行优化，3) 使用现场采集的样本验证设计的用于特异性检测 ToLCPV 和 ToLCCeV 的引物，4) 使用全长基因组 DNA计算机模拟识别 RFLP 模式。已发表的引物能够与 ToLCPV 菌株以及 ToLCCeV、ToLCMiV 种类退火，因此需要在实际实验中验证这些引物以确定其特异性。引物 ToLCPV19 和 ToLCCeV19 分别设计用于特异性检测 ToLCPV 和 ToLCCeV 种类，并将 PCR 优化至不同的退火温度：53℃、55℃ 和 57℃。当使用 ToLCPV19 和 ToLCCeV19 引物时，在感染 ToLCPV 的番茄样品和感染 ToLCCeV 的番茄样品上均观察到约 200 bp 的扩增子。此外，在不同退火温度下，条带大小和条带强度没有差异。对设计的引物进行了验证，但仅对少数选定的番茄样品进行了验证，因此应进行进一步验证以确定设计引物的特异性。 RFLP 分析表明，限制性酶 EcoRI 可以区分 ToLCPV、ToLCCeV 和 ToLCMiV，因为它在每个Begomovirus物种中产生不同数量的条带。