植物病理学与微生物学杂志

抽象的

开发定量实时聚合酶链式反应方案，用于快速检测和区分木质部杆菌亚种和木质部杆菌亚种多重

布列塔尼·皮尔斯、丽莎·莫拉诺和布莱克·贝克斯汀

木质部限制性病菌是一种革兰氏阴性、木质部受限的植物病原菌，通过玻璃翅尖枪菌（Homalodisca vitripennis）在宿主之间传播。木质部限制性病菌有多个亚种，表现出一定程度的宿主特异性。木质部限制性病菌亚种 fastidiosa 是葡萄皮尔斯病的病原体。木质部限制性病菌亚种 multiplex 和木质部限制性病菌亚种 sandyi 在北美很常见，但不会引起皮尔斯病。快速诊断以确定木质部限制性病菌的存在并区分这些亚种对于有效管理和预防皮尔斯病是必要的。在本研究中，比较了使用定量实时聚合酶链反应区分木质部限制性病菌亚种的三种方法。评估了 SYBR ® green、Eva Green ® 和 Takara SYBR Green ® 部分 gyraseB 扩增子、zot1 基因扩增子和五个 tonB 扩增子的熔解曲线分析的一致性和质量。开发了基于 TaqMan ® 和 Molecular Beacon ® 杂交探针的诊断方案，重点关注 X. fastidiosa subsp. 在 zot1 基因中的多重插入。我们发现基于 SYBR ® Green 和 TaqMan ® 的诊断方案无法提供准确、一致地区分 X. fastidiosa 亚种所需的分辨率。我们利用 Molecular Beacon ® 探针开发的诊断方案可高度特异性和可靠地区分 X. fastidiosa 亚种，即使在亚种混合在溶液中的情况下也是如此。这些新方法提供了一种更可靠的方案，可通过该方案快速识别 X. fastidiosa 亚种，以用于实验室研究和样本诊断。