药物分析学报

抽象的

利用表面等离子体共振研究 HSP60-Cypd 结合动力学

叶卡捷琳娜·科罗布科娃

目的：伴侣蛋白 HSP60 与环丝氨酸蛋白酶 D (CypD) 的结合代表一种致癌途径，可阻止线粒体进行通透性转换孔 (PTP) 开放。因此，HSP60 可被视为设计化学抑制剂的有吸引力的靶标。HSP60 结构的复杂性阻碍了使用标准筛选方法。本研究旨在分析 CypD 与不同 HSP60 域相互作用的动力学。方法：采用表面等离子体共振 (SPR) 技术。使用氨基偶联化学将映射到 HSP60 各个区域的抗体固定在 CM5 生物传感器芯片上。HSP60 附着在芯片上的各种抗体上，导致蛋白质的不同方向，并分析其与 HSP60 结合的动力学。结果：HSP60-CypD 相互作用的解离速率常数介于 5.5 × 10-4 s-1 和 16 × 10-4 s-1 之间。解离平衡常数从 15.8 nM 到 43.5 nM 不等。识别 HSP60 赤道域中残基 50 和 100 之间的区域的抗体阻止其与 CypD 结合。结论：SPR 技术在分析 CypD 和 HSP60 亚基之间的相互作用方面被证明是成功的。结合强度与相对较强的抗体-抗原结合相当。CypD 优先与 HSP60 亚基内的特定结构域结合表明设计分子拮抗剂的可能性。