微生物与生化技术杂志

抽象的

SAK融合人干扰素α在大肠杆菌中的表达及纯化

Shardul Salunkhe、Bhaskarjyoti Prasad、Ketaki Sabnis-Prasad、Anjali Apte-Deshpande 和 Sriram Padmanabhan

描述了一种改进大肠杆菌来源的人干扰素 -α (rhIFN ?2b) 从包涵体中作为葡萄球菌激酶 (SAK) 融合蛋白的重新折叠和纯化方法。这种融合蛋白不需要补充稀有密码子来表达，并且在 37°C 下稳定。重新折叠的最佳条件是使用温和的变性剂，而无需任何其他试剂来防止聚集。SAKrhIFN ?2b 融合蛋白通过两步纯化成功纯化，并使用肠激酶将其裂解成两个片段，即 SAK 和 IFN。发现这两种蛋白质都具有生物活性，表明两种融合伙伴都正确折叠。裂解的 IFN 在 RP-HPLC 上显示出与细菌来源的未标记纯化 IFN 相似的保留时间，以及在 Agilent 2100 Bioanalyzer 上的相似分子量，表明肠激酶裂解后 IFN 的加工正确。在类似的实验条件下，SAK-IFN 的表达水平比未标记的 IFN 的表达水平高出两倍。