单细胞生物学

抽象的

基于侧群表型的 CWR-R1 前列腺癌细胞系和人类前列腺组织中分离的单细胞的基因表达

Kalyan J Gangavarapu、奥斯汀·米勒和温迪·J·胡斯

在单细胞水平上定义生物信号可以识别引发癌症的驱动突变。分离单细胞的技术（如微流体分选和磁性捕获系统）具有以下局限性：成本高、劳动强度大以及需要大量细胞。因此，我们当前研究的目标是确定一种成本和劳动效率高、可靠且可重复的技术，允许分离单细胞进行分析，以促进实验室的常规使用，包括标准逆转录 PCR (RT-PCR)。

在本研究中，我们利用从 CWR-R1 前列腺癌细胞系和人类前列腺临床标本中分离的单个前列腺细胞，基于染料循环紫 (DCV) 的 ATP 结合盒 (ABC) 转运蛋白流出、侧群分析。确定了四个基因的表达：ABCG2；醛脱氢酶 1A1 (ALDH1A1)；雄激素受体 (AR)；和胚胎干细胞标记 Oct-4。

本研究在 CWR-R1 细胞系中的结果显示，ABCG2 和 ALDH1A1 基因分别在 67% 的单侧细胞群和 17% 或 100% 的非侧细胞群中表达。使用从临床标本中分离的单个细胞进行的研究表明，Oct-4 基因仅在 22% 的单侧细胞群和 78% 的单个非侧细胞群中检测到。而 AR 基因在从同一人类前列腺临床标本中分离的单侧细胞群和非侧细胞群中均有表达。

这些研究表明，对通过 FACS 分离的单细胞进行 RT-PCR 可以成功确定来自细胞系和酶消化组织的单细胞中的基因表达。虽然这些研究提供了简单的是/否表达读数，但更灵敏的定量 RT-PCR 可以在必要时提供更多信息。