生物等效性和生物利用度杂志

抽象的

药代动力学研究中采用高效液相色谱结合电喷雾串联质谱法对人血浆中的羟钴胺进行定量分析

古斯塔沃·门德斯 (Gustavo D. Mendes)、法比亚娜·门德斯 (Fabiana D. Mendes)、马里纳尔瓦·费雷拉·桑帕约 (Marinalva Ferreira Sampaio)、安东尼奥·塞尔吉奥·西尔维拉 (Antonio Sergio Silveira)、陈路石 (Lu Shi Chen)、哈立德·M·阿尔克哈菲 (Khalid M. Alkharfy) 和吉尔伯托·德努奇 (Gilberto De Nucci)

描述了一种以对乙酰氨基酚为内标 (IS) 定量测定人血浆中羟钴胺的快速、灵敏且特异的方法。使用有机溶剂（100% 乙醇；-20°C）通过液-液萃取从血浆中提取分析物和 IS。通过高效液相色谱-电喷雾串联质谱 (HPLC-MS-MS) 分析提取物。色谱分析采用 Prevail C8 3 μm 分析柱（2.1×100 mm id）。该方法的色谱运行时间为 3.4 分钟，线性校准曲线在 5-400 ng.mL-1 范围内（r>0.9983）。定量限为 5 ng.mL-1。该方法也在不使用内标的情况下进行了验证。 5、15、80 和 320 ng/mL 时，使用 IS 的批内验证精密度分别为 9.6%、8.9%、1.0% 和 2.8%，不使用 IS 的批内验证精密度分别为 9.2%、8.2%、1.8% 和 1.5%。5、15、80 和 320 ng/mL 时，使用 IS 的批内验证准确度分别为 108.9%、99.9%、98.9% 和 99.0%，不使用 IS 的批内验证准确度分别为 101.1%、99.3%、97.5% 和 92.5%。 5、15、80 和 320 ng/mL 时，使用 IS 的批次间验证的精确度分别为 9.4%、6.9%、4.6% 和 5.5%，而不使用 IS 的批次间验证的精确度分别为 10.9%、6.4%、5.0% 和 6.2%。5、15、80 和 320 ng/mL 时，使用 IS 的批次间验证的准确度分别为 101.9%、104.1%、103.2% 和 99.7%，而不使用 IS 的批次间验证的准确度分别为 94.4%、101.2%、101.6% 和 96.0%。该 HPLC-MS-MS 程序用于评估健康男女志愿者（10 名男性和 10 名女性）肌肉注射 5000 μg 羟钴胺后的药代动力学。志愿者具有以下临床特征（根据性别并以平均值±SD [范围] 表示）：男性：年龄：32.40±8.00 岁[23.00-46.00]，身高：1.73±0.07 米[1.62-1.85]，体重：72.48±10.22 千克[60.20-88.00]；女性：年龄：28.60±9.54 岁[18.00-44.00]，身高：1.60±0.05 米[1.54-1.70]，体重：58.64±6.09 千克[51.70-66.70]。从羟钴胺血浆浓度与时间曲线中获得以下药代动力学参数：AUClast、T1/2、Tmax、Vd、Cl、Cmax 和 Clast。药代动力学参数为：Cmax 为 120 (± 25) ng/mL，AUClast 为 2044 (± 641) ng.h/mL，Clast 为 8 (± 3.2) ng.mL-1，T1/2 为 38 (± 15.8) 小时，Tmax 为 2.5 (范围 1-6) 小时。女性志愿者的 AUC（1706 ± 704）ng.h/mL）明显较低（p=0.0136），清除率（2.91 ± 1.41 L/hr）明显较高（p=0.0205），而男性志愿者的 AUC（2383 ± 343 ng.h/mL）和清除率（1.76 ± 0.23 L/hr）则分别为 2383 ± 343 ng.h/mL 和 1.76 ± 0.23 L/hr。这些药代动力学差异可以解释女性患者维生素 B12 缺乏症患病率较高的原因。所述方法在不使用内标的情况下得到了很好的验证，这种方法应该在其他 HPLC-MS-MS 方法中进行研究。