细菌学与寄生虫学杂志

抽象的

空肠弯曲菌复合体 I 中 NuoX 和 NuoY 配体结合特异性的鉴定

Lirio I. Calderon-Gomez、Christopher J. Day、Lauren E. Hartley-Tassell、Jennifer C. Wilson、George L. Mendz 和 Victoria Korolik

质子泵 NADH：呼吸途径的泛醌（复合物 I）的成分已在空肠弯曲菌基因组中被鉴定出来。然而，编码复合物 I 的 NADH 脱氢酶模块亚基的典型基因 nuoE 和 nuoF 却不存在。相反，编码 NuoX 和 NuoY 的基因 cj1575c 和 cj1574c 分别存在于对应于 nuoE 和 nuoF 的位点中。生物信息学分析表明，在所有测序的空肠弯曲菌菌株和其他弯曲杆菌种中都存在 nuoX 和 nuoY 同源物，并且在其他 É›-Proteobacteria 中也存在直系同源物。为了了解 NuoX 和 NuoY 蛋白在空肠弯曲菌呼吸过程中的参与情况并表征它们的配体结合特异性和亲和力，开发了三羧酸循环阵列作为识别可与该循环中间体以及其他代谢物结合的蛋白质的工具。该阵列显示 NuoX 结合 FAD2+，NuoY 结合 FAD2+ 和电子供体苹果酸和乳酸。饱和转移差异核磁共振研究证实了 NuoY 结合配体，并表明 FAD2+ 的黄素部分与 NuoY 的相互作用比腺嘌呤部分更强。表面等离子体共振产生的亲和力数据表明 NuoY 与 FAD2+ 结合的 KD 为 337 nM； NuoX 和 NuoY 对 NADH 的亲和力分别为 KD 403 nM 和 478 nM，对 NAD+ 和 FAD2+ 的亲和力则低 10 倍。数据表明，黄素-腺嘌呤二核苷酸可以优先与空肠弯曲菌复合物 I 中的 NAD 结合。