生物学和医学

抽象的

脂多糖 (LPS) 和蛋白质-LPS 复合物：通过凝胶电泳、质谱和生物测定进行检测和表征

尤金尼奥·哈迪、卡里达·罗德里格斯和路易斯·E·特鲁希略

发现和表征脂多糖 (LPS) 与特定受体的相互作用及其产生的病理生理效应的先决条件是对 LPS 物种进行全面的结构分析。本简要综述旨在总结凝胶电泳与其他生化技术相结合用于检测和表征 LPS 的使用情况。单独的脂多糖聚集体或含有 LPS 和蛋白质/肽的混合物可以通过天然琼脂糖凝胶电泳 (NAGE) 分离，之后使用咪唑和锌盐检测 LPS。使用考马斯亮蓝 R-250 的双染色过程使 NAGE 可用于检测和研究蛋白质-LPS 相互作用。对于成分分析，通过表面活性剂-聚丙烯酰胺凝胶电泳以高分辨率分离 LPS 聚集体。在用锌-咪唑进行反向染色并从凝胶微粒中洗脱后，糖型特异性 LPS 即可进行结构和生物分析。对于基于串联电喷雾电离质谱法 (ESI-MS/MS) 的寡糖序列分析，LPS 需要经过弱酸性水解、去磷酸化和全甲基化。此外，O-脱乙酰化 LPS 形式可以通过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法进行分析。与未纯化 LPS 的光谱相比，微纯化 LPS 的质谱显示异质性降低且信噪比增加。此外，在 MS 之前对 LPS 进行微纯化可以提高检测较少 LPS 糖型的灵敏度。微纯化 LPS 级分可用于形成自组装纳米聚集体，可通过动态光散射检测。O-侧链长度对 LPS 聚集体 Z 电位的影响可以通过基于激光多普勒电泳的测量来估计。如此获得的糖型特异性 LPS 不仅在化学上完整，而且在生物上也具有活性，如通过鲎变形细胞裂解物试验、TNF-α 测定和对人类 Toll 样受体 4 的激动作用所测试的那样。