干细胞研究与治疗杂志

抽象的

未检测到成年小鼠成纤维细胞中无病毒重编程干细胞衍生的多巴胺能神经元的潜在癌症风险

刘刚

目的：通过重编程体细胞进行干细胞替代疗法是神经退行性疾病和个性化医疗的一种重要的有前途的治疗方法。由于携带病毒的重编程基因会带来相当大的肿瘤形成风险，目前的方法倾向于用非病毒系统取代病毒模式。然而，人们仍然非常担心这些重编程基因的致癌特性。目前没有直接证据可以证实非病毒系统不会影响重编程后最终产物中的基因组 DNA 整合和诱变事件。
方法：我们使用一种含有四个重编程基因的独特非病毒载体评估了重编程干细胞衍生的多巴胺能神经元的潜在癌症风险。重编程干细胞衍生的多巴胺能神经元是成年小鼠成纤维细胞培养 50 天后的最终产物。培养 6 个月后，对这些细胞进行癌症风险评估。
结果：首先使用多种干细胞生物标志物检查总体癌症风险评估。我们没有检测到这些生物标志物的任何过度表达。此外，我们评估了在大量细胞培养 6 个月后最重要的神经传递因子是否表达。我们的结果表明，仅检测到酪氨酸羟化酶 (TH) 的强基因表达，这是多巴胺合成中的限速酶。此外，通过测序 TH 基因组 DNA 确认了 TH 阳性多巴胺能神经元的最终产物。我们的数据表明，四个重编程基因均未整合到宿主细胞的基因组 DNA 中，并且在对 TH 基因组 DNA 相关的完整 13 个编码外显子和两端部分非翻译区进行基因测序后没有发生其他诱变事件。
结论：重编程成年小鼠成纤维细胞衍生的多巴胺能神经元被证明是一种安全的技术和方法，可作为神经退行性疾病的潜在疗法。