微生物与生化技术杂志

抽象的

海洋内生曲霉 ALAA-2000 在深层和固态发酵条件下生产、纯化和表征 L-天冬酰胺酶

Mervat Morsy Abbas Ahmed、Nageh Abo Dahab F、Taher Taha M 和 Fareed Hassan SM

从海洋软体海绵Aplysina fistularis中分离得到的所有内生真菌中，72.2%能够产生L-天冬酰胺酶。在所有获得的分离株中，选择了曲霉菌ALAA-2000，它是在不同农业废弃物的深层发酵（SMF）和固态发酵（SSF）下生产抗癌剂L-天冬酰胺酶的高活性生产者，以优化提取工艺；优化影响SSF中L-天冬酰胺酶生产的理化参数并优化纯化的L-天冬酰胺酶参数。在SSF下用40°C、150rpm的热水从大豆中回收30分钟的最大L-天冬酰胺酶活性为23.34 U/ml，在以葡萄糖为碳源、天冬酰胺为氮源的深层发酵下回收的酶活性为30.64 U/ml。通过硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析（sephadex G-200）从曲霉菌ALAA-2000的培养上清液中纯化出两种L-天冬酰胺酶（AYA-1和AYA-2）。酶的分子量分别为25kDa（AYA-1）和31kDa（AYA-2）。对纯化的L-天冬酰胺酶的参数进行了优化，AYA-1酶（pH 6.0，在30°C至50°C下稳定60分钟，反应时间15分钟，底物浓度1.275mg / ml）和AYA-2酶（pH 10，在30°C至70°C下稳定60分钟，反应时间15分钟，底物浓度1.275mg / ml）。而金属蛋白酶抑制剂，螯合剂EDTA对L-天冬酰胺酶没有影响。这些发现表明 L-天冬酰胺酶不是金属蛋白酶。