干细胞研究与治疗杂志

抽象的

流式细胞术和实时 PCR 定量分析血液分离产品中的巨核细胞祖细胞

Leinøe Eva、Nielsen Kaspar R、Baech John、Steffensen Rudi、Dybkaer Karen、Boegsted Martin 和 Johnsen Hans E

背景和目的：通过计数移植物内的 CD34+/CD61+ 巨核细胞祖细胞，可以改善自体外周血干细胞移植 (PBSCT) 的质量评估。流式细胞术(FC) 计数亚群很难标准化，因为血小板或微球粘附可能导致特异性低。我们旨在分析血小板对造血干细胞的粘附，并建立 CD34 和 CD61 基因转录物的定量实时聚合酶链反应 (RT-qPCR) 检测。该分析用于研究 CD34 和 CD61 作为非霍奇金淋巴瘤 (NHL) PBSCT 后晚期血小板恢复的预测因子。材料和方法：对为自体移植而收获的白细胞分离产物进行 FC 分析，并对分选的细胞应用共聚焦显微镜。临床评估包括分析 21 名连续接受高剂量治疗和 PBSCT 治疗的 NHL 患者的白细胞分离产物。早期恢复定义为移植后第 12 天之前观察到的血小板计数 > 20x10(9)/L，晚期恢复定义为移植后第 12 天之后观察到的血小板计数 < 20x10(9)/L。为了进行 RT-qPCR 分析，从解冻的白细胞分离产物中分选出 CD34+ 细胞，提取 RNA 并逆转录为 cDNA，以便使用 TaqMan 探针进一步分析 CD34 和 CD61 mRNA 水平。结果：通过 FC 识别的 CD34+/CD61+ 细胞形成特定亚群，没有成熟血小板粘附的迹象。CD34+/CD61+ 细胞表达在互补 CD34+/CD61- 细胞中未发现的 CD61 mRNA 转录本。未发现基于 FC 的计数与对巨核细胞祖细胞亚群的 RT-qPCR 分析估计之间呈正相关。通过比较 21 名早期和晚期血小板恢复患者的样本来评估临床影响，结果显示 CD61/BACT（β-肌动蛋白）、CD34/BACT 或 CD61/CD34 mRNA、CD34+ 分类细胞之间的表达比率没有预测影响。结论和观点：可以通过 FC 和 RTqPCR 分析识别 CD34+/CD61+ 细胞的特定子集；然而，该子集的计数与 PBSCT 后的血小板恢复无关。未来需要在欧洲血液和骨髓移植组 (EBMT) 的国际合作中对一组移植失败患者进行预测价值研究。