干细胞研究与治疗杂志

抽象的

成功诱导法布里病小鼠模型中的多能干细胞：开发安全的慢病毒基因疗法

Makoto Yoshimitsu、Koji Higuchi、Naomichi Arima、Jeffrey A Medin 和 Toshihiro Takenaka

诱导性多能干细胞 (iPS) 现已被公认为通过自体移植进行细胞修复的宝贵工具。这些细胞可通过诱导转录因子 Oct- 3/4、Klf4 和 Sox2 从体细胞中获得。在本研究中，我们成功地从 α-半乳糖苷酶 A 基因敲除小鼠（一种著名的法布里病小鼠模型）的尾尖成纤维细胞中建立了 iPS 细胞。这些法布里-iPS 细胞表现出胚胎干细胞 (ES) 表型，其特征是 SSEA-1 表达、碱性磷酸酶活性增加、逆转录病毒转基因沉默和胚状体 (EB) 形成。将法布里-iPS 细胞皮下接种到裸鼠体内导致畸胎瘤形成。在第 6 天，分化培养基中的 EB 显示出造血谱系特异性基因表达。此外，我们观察到在 OP9 基质细胞上培养 5-7 天的 EB 会自发收缩。RT-PCR 表明，各种心脏标志物基因（例如 Nkx2.5、Gata4、Tnnt2（心脏肌钙蛋白 T）和 Mlc2a）在法布里 iPS 细胞分化培养物中的表达高于对照饲养细胞。为了评估它们在基因治疗中的潜在用途，对法布里-iPS 细胞进行了慢病毒转导，其中 α-半乳糖苷酶 A cDNA（法布里病的治疗基因）转导。这种转导导致细胞内和分泌的 α-半乳糖苷酶 A 活性升高。转导后 30 多天内，ES 细胞特异性基因表达谱保持不变。这些发现表明，法布里-iPS 细胞易于获得，并且适用于基因治疗。