干细胞研究与治疗杂志

抽象的

胚胎干细胞中替代启动子对人类 NANOG 的转录调控

Satyabrata Das、Snehalata Jena、Eun-Mi Kim、Nicholas Zavazava 和 Dana N. Levasseur

简介：多能干细胞用于细胞治疗的潜力取决于对其独特能力的分子机制的全面了解，这些机制是其在进行无限自我更新的同时指定所有胚层细胞的能力的基础。可变剪接和可变启动子选择通过增加从单个基因位点产生的转录本数量来促进这一机制，从而能够表达生物学作用可能不同的新型蛋白质变体。含有同源结构域的转录因子 NANOG 在维持胚胎干细胞 (ESC) 的多能性方面起着关键作用。因此，有必要彻底了解 ESC 中 NANOG 位点的转录调控。

方法：从使用高通量测序方法获得的数据中确定了人类胚胎干细胞中 NANOG 的调控足迹和转录水平。在逆转录提取的 RNA 的人类 ESC 后，使用定量实时 PCR 来验证从注释的 NANOG 转录起始上游延伸的区域转录本的表达。使用启动子报告基因和电泳迁移率分析进行启动子识别和表征。

结果：在 NANOG 中已知转录起始位点上游区域观察到转录活性染色质标记和转录因子结合位点富集
。来自该转录活性区域的新转录本的表达证实了人类 ESC 中存在 NANOG 替代剪接。我们在此上游区域发现了一个强度显著的替代 NANOG 启动子。我们还发现 NANOG 通过与其近端下游启动子结合来自我调节其表达。

结论：我们的研究揭示了人类 ESC 中来自 NANOG 的新转录本表达，表明
替代剪接增加了源自 NANOG 基因座的转录本的多样性，并且这些转录本由替代启动子表达。替代剪接和替代启动子使用协同调节 NANOG，使其在 ESC 的维持中发挥作用。