基因科技

抽象的

应用 CRISPR/cas9 定向同源重组生成具有 X 连锁微小 RNA 基因座条件敲除的人类肿瘤细胞

Aurélie Van Tongelen、Axelle Loriot、Olivier De Backer 和 Charles De Smet

研究 microRNA 的细胞功能需要采用遗传策略来产生其功能丧失。最近，提出了一种新的靶向基因组删除方法，该方法基于使用 Cas9/gRNA 核糖核蛋白复合物诱导位点特异性 DNA 切割，结合同源重组依赖性插入包含 Cre-lox 或 FLP-FRT 系统序列的盒式磁带。在这里，我们提供了一份技术报告，描述了这种 CRISPR/Cas9 定向同源重组程序在人类肿瘤细胞生成中的应用，其中可以诱导 X 连锁 microRNA 簇 (miR-105/miR-767) 的条件性敲除。我们描述了遗传工程和细胞克隆选择的连续步骤，这些步骤使我们能够生成具有预期基因组编辑的细胞。