微生物与生化技术杂志

抽象的

基于阿拉伯糖启动子的具有生物活性的重组人类生长激素在大肠杆菌中的表达：过度表达的策略和简单的纯化方法

Sudheerbabu Soorapaneni、Anjali Apte-Deshpande、Ketaki Sabnis-Prasad、Jitendra Kumar、Veena A Raiker、Prakash Kotwal 和 Sriram Padmanabhan

设计并实施了基于阿拉伯糖启动子的E. coli表达系统，用于重组人生长激素 (rhGH) 的生产和纯化。摇瓶研究表明，与原始 pBAD24 载体相比，改良 pBAD24 载体 (pBAD24M) 中表达的 rhGH 量相当可观。虽然在生物反应器中使用 pBAD24 时， rhGH 水平仅达到 75 mg l ^{-1，但在类似条件下使用 pBAD24M 载体时，rhGH 水平达到 ~1860 mg l -1，}这是通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 分离的蛋白质密度测定法判断的。通过两个简单的离子交换色谱步骤，尿素变性后成功从包涵体中纯化 rhGH 蛋白，总回收率为 40%，纯化的 hGH 达到 ~750 mg l ^-1，这是迄今为止报道的纯化 rhGH 的最高产量。通过N端序列分析、CD光谱研究、质谱指纹分析和Agilent 2100生物分析仪分析，对纯化的细菌来源的rhGH进行了表征，其生物活性与市售的hGH（生长激素）相当。