植物病理学与微生物学杂志

抽象的

比色免疫捕获逆转录环介导等温扩增试验快速检测马铃薯 Y 病毒

穆罕默德·阿明·阿尔马西和赛义德·穆罕默德·侯赛尼·德哈巴迪

环介导等温扩增（LAMP）检测是一种在恒温下扩增DNA的新技术，具有高特异性、灵敏度、快速性和效率。为了将逆转录PCR（RT-PCR）、逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）和DAS-ELISA等诊断检测所需的时间减至最短，采用并优化了基于马铃薯Y病毒（PVY）基因组的创新比色IC-RT-LAMP和IC-RT-PCR方案。首先，进行DAS-ELISA检测，在包含95个可疑样本的集合中检测病毒。最后，检测出5个样本为阳性样本。然后，通过分子方法验证阳性样本。在这方面，所有四个RT-LAMP引物（即F3、B3、FIP和BIP）以及RT-PCR引物（F和B）都是根据PVY基因组的外壳蛋白基因（CP）选择的。尽管 DAS-ELISA、RT-PCR 和 RT-LAMP 检测法都可以成功检测出阳性感染植物样本，但考虑到时间、安全性、灵敏度、成本和简便性，RT-LAMP 检测法总体上更胜一筹。此外，结果表明，与 RT-PCR 相比，RT-LAMP 检测法灵敏度高 100 倍，速度快 3 倍。LAMP 检测法是在水浴中完成的，无需任何热循环仪或先进的实验室设备。同时，在六种用于准确检测 IC-RT-LAMP 产品的不同视觉染料中，羟基萘酚蓝、GeneFinder ^TM和 SYBR Green I 可以在封闭的试管方法中产生长时间稳定的颜色变化和亮度，以防止交叉污染风险，最终被认定为最佳染料。因此，我们提出将这种比色检测法作为一种高度可靠的替代病毒识别系统，用于 PVY 识别和其他可能基于病毒的疾病。