微生物与生化技术杂志

抽象的

从零售牡蛎组织中分离细菌 DNA 的不同方法的比较

张茜、戴敏、刘艳红、周敏、史贤明、王大鹏

牡蛎是滤食性动物，进食时会在水中生物累积细菌。为了评估从零售牡蛎组织（包括鳃和消化腺）中提取的细菌基因组 DNA，使用了四种分离方法。使用 Allmag™ 血液基因组 DNA（Allrun，上海，中国）、MiniBEST 细菌基因组 DNA 提取试剂盒（Takara，大连，中国）以及苯酚-氯仿和煮沸裂解法进行基因组 DNA 提取。使用分光光度计测量基因组 DNA 的浓度。通过 16S rDNA 的 PCR 扩增然后确定扩增子克隆到 pMD19-T 载体中的效率来评估基因组 DNA 的纯度。此外，还使用一对针对副溶血弧菌的物种特异性引物通过 PCR 测定来评估细菌 DNA 质量。我们的结果表明，两种商用试剂盒产生的 DNA 纯度最高，但产量最低。苯酚-氯仿法虽然耗时较长，但产量最高。沸腾裂解法简单且成本低廉；然而，它只适用于在富集步骤后从零售样品中的细菌中分离基因组 DNA。这两种商业试剂盒非常适合从零售牡蛎组织中提取基因组 DNA，而无需富集。