生物分子研究与治疗杂志

抽象的

通过 N-羟基磺化琥珀酰亚胺连接的生物素试剂对血管紧张素 II 进行复杂酰化

刘勤峰、Andres Lam 和 Achyut Kathuria

N-羟基磺化琥珀酰亚胺连接生物素 (磺化NHS-生物素) 是水溶性生物素标签，通常用于通过快速 N-酰化一级胺将生物素部分结合到蛋白质上。除了预期的 Ag-II N 端 N-酰化外，LC-MS 还鉴定出磺化NHS生物素对血管紧张素 II (Ag-II) 酪氨酸的意外 O-酰化和无法表征的第三位点的酰化。N-酰化仅在 pH 7.2 和 8.0 的 0.1% 甲酸中发生不完全水解，而两种意外酰化在两种条件下均水解，但它们在 0.1% 甲酸中的水解速度要快得多。二硫苏糖醇处理选择性催化两种意外酰化的水解，但不催化 Ag-II 的 N-酰化。 Ag-II 酪氨酸的 O-酰化最大产率为 pH 7.2 时为 99%，pH 8.0 时为 95%，而与过量磺基 NHS-生物素反应时赖氨酸的 N-酰化产率为 pH 7.2 时为 94%，pH 8.0 时为 96%。Ag-II 第三个未表征位点的酰化在 pH 7.2 时显示最大产率约为 17%，但在 pH 8.0 时产率更高 (≥ 47%)，反应在 30 分钟内完成。Ag-II 酪氨酸的意外 O-酰化在 pH 7.2 或 pH 8.0 时在 1 分钟内发生，与 N-酰化一样快，而另一种意外酰化在 pH 8.0 时需要更多时间才能完成。