干细胞研究与治疗杂志

抽象的

组成型GFP-UTF1表达干扰ES和EC细胞分化

Rajkumar P. Thummer、Loes J. Drenth-Diephuis 和 Bart JL Eggen

胚胎干细胞具有自我更新能力，可以分化为三种胚胎生殖谱系的所有细胞类型。未分化胚胎细胞转录因子 1 (UTF1) 基因在 ES 细胞中高度表达，我们之前报告称 UTF1 与染色质紧密相关，是多能小鼠胚胎干 (ES) 和胚胎癌 (EC) 细胞分化所必需的。在本研究中，我们生成了组成性表达 GFP-UTF1 的 ES 和 EC 细胞系，以进一步研究其在分化中的作用。组成性表达 GFP-UTF1 的 ES 和 EC 细胞的增殖受到抑制，并且仍然依赖 LIF 进行自我更新。GFP-UTF1 过表达 ES 细胞的胚状体 (EB) 分化既表现出正常分化，也表现出细胞亚群的延迟或不完全分化。GFP-UTF1 在未分化细胞中持续表达，而在分化细胞中未检测到 GFP-UTF1 表达。表达 GFP-UTF1 的 ES 细胞在 DMSO 作用下正常分化，而 EC 细胞分化则完全受阻。当用 RA 处理表达 GFP-UTF1 的 ES 和 EC 细胞时，分化标志物被诱导，内源性 UTF1 和 GFP-UTF1 蛋白水平降低。然而，仍检测到 GFP-UTF1 和 UTF1（在 ES 细胞中）mRNA，表明 (GFP-)UTF1 蛋白的降解先于 (GFP-)UTF1 mRNA 的下调，表明 RA 诱导了 UTF1 降解。总结这些数据表明，与 UTF1 耗竭类似，GFP-UTF1 的过度表达会干扰 ES 和 EC 细胞的分化。