血液疾病与输血杂志

抽象的

用于临床试验的人类内皮祖细胞和内皮细胞的冷冻保存和计数

Bogoslovsky T、Wang D、Maric D、Scattergood-Keepper L、Spatz M、Auh S 和 Hallenbeck J

背景：内皮祖细胞 (EPC) 是内皮损伤的标志物，可作为介入临床试验中血管修复的替代标志物。本研究的目的是改进一种从外周血中分离外周血单核细胞 (PBMC) 和计数 EPC 和成熟内皮细胞 (EC) 的方法，并评估冷冻保存对 PBMC 活力以及 EPC 和 EC 数量的影响。患者/方法：在健康志愿者中分析 EPC 和 EC，这些 PBMC 收集在 CPT（细胞制备管）中，并使用以下方法冷冻保存：1) Gibco RecoveryTM 细胞培养冷冻培养基，2) 定制冷冻培养基。使用 DAPI 测试 PBMC 活力。EPC 以 CD45- CD34+CD133+/-VEGFR2+/- 为门控，EC 以 CD45-CD146+CD34+/-VEGFR2+/- 为门控。结果：在 -80°C 下冷冻保存 7 天，PBMC 存活率从 94 ± 0.5%（新鲜）降至 84 ± 4%（定制培养基）和 69 ± 8%（Gibco 培养基），而在 -65°C 下冷冻保存，PBMC 存活率降至 60 ± 6%（p<0.001，定制培养基）和 49 ± 5%（p<0.001，Gibco 培养基）。在新鲜样本中，早期 EPC（CD45- CD34+CD133+VEGFR2+）计数为 0.2 ± 0.06%，晚期 EPC（CD45-CD146+CD34+VEGFR2+）计数为 0.6 ± 0.1%，成熟 EC（CD45-CD146+CD34-VEGFR2+）计数为 0.8 ± 0.3% 的活 PBMC。使用 Gibco 和定制冷冻介质在 -80ºC 下冷冻保存 7 天会降低 EPC 和 EC 的数量，但这种减少并不具有统计学意义。结论：我们的数据表明，在 -80°C 下冷冻保存 7 天会降低 PBMC 的活力以及 EC 和 EPC 亚群的数量（尽管并不显著）。该方法可能为分离和短期冷冻保存 EPC 亚群和成熟 EC 提供一种优化方法，适用于多中心试验。