全球生物学、农业与健康科学杂志

抽象的

设计、优化和验证用于抗 rho-γ 球蛋白生产工业过程控制中 Igg-anti-D (rho) 定量的流式细胞术检测方法

塞尔吉奥·A·奥维耶多、苏珊娜·维塔利、豪尔赫·扎祖尔

新生儿溶血性疾病的主要原因之一是孕妇在红细胞中不具有 D 抗原的情况下，在持续的抗原刺激下会产生抗 D 抗体。为了防止并发症，需要监测孕妇的抗 D 抗体水平，并通过预防性使用抗 D 免疫球蛋白 (IgG 抗 D) 来防止致敏。迄今为止，血浆和成品中的抗 D (IgG 抗 D) 的监测和滴定是通过 Technicon 自动分析仪、放射免疫分析 (RIA) 和酶免疫分析 (EIA) 进行连续流动分析。在我们的实验室中，为了量化 Gamma-Rho UNC 和精制过程产品的抗 D 抗体，我们开发了一种“自制”流式细胞术技术，作为欧洲药典参考方法的替代测试。使用多克隆抗 Rho 抗体和抗 FITC（异硫氰酸荧光素）标记的人类 IgG 来测量商业丙种球蛋白、半加工和人类血浆制剂中的抗 D 抗体浓度。该方法是使用第一个国际 WHO 抗 D IgG 标准（69/419）开发的。在该方法中使用的红细胞浓度（5 x 104 细胞/ul）下，自凝集不会造成干扰。获得的剂量反应曲线（MFI 与 Log C）在采用的工作范围内呈线性，相关系数为 0.99。特异性和回收率测试令人满意，阴性对照显示荧光水平不明显，不会对测定造成严重干扰。已知红细胞中抗 D 位点抗原的水平因表型而异，我们的结果表明，表型为 R1R1 的红细胞在该测试中表现最佳，必要时可以用 R1R2 细胞替换。该方法根据 NIBSC 专家组 N°6B 和欧洲药典的标准进行了验证，他们已经标准化了用于评估抗 D 的类似程序。流式细胞术可以在不同浓度的抗 D（100-0.9 ug/ml）和不同的生物基质（如成品、预填充浓缩产品和 Cohn 方法的 II 部分）中获得准确、精确、灵敏和特定的测定结果。除了相对较低的成本外，该方法的应用优势还包括强荧光信号不需要扩增，使用高度稀释的样品可最大限度地降低 IgM-抗 D 或聚合物凝集的风险。这是一种测定血清抗 D 水平或量化免疫球蛋白溶液中浓度的简单、快速且可靠的方法。