Chun-Ting Yuen、Catpagavali Asokanathan、Alexandra Douglas-Bardsley、Kevin Markey、Peter Rigsby 和 Dorothy Xing
百日咳疫苗在全世界的免疫计划中发挥着重要作用，组胺致敏试验 (HIST) 目前是无细胞百日咳联合疫苗的官方批量放行试验。HIST 是一种鼠类动物试验，存在很大的测定变异性问题和伦理问题。因此，为了应对 3R，我们开发了一种基于百日咳毒素 (PTx) 的两个功能域的生化检测系统：酶活性 A 原体和碳水化合物结合 B 寡聚体。这两种生化测试与 PTx 毒性作用的临床相关性已经得到证实。为了评估该检测系统的实用性，还进行了一项涉及 9 个国家的国际合作研究，研究方法的可转移性，结果表明该检测系统可以在控制实验室和疫苗生产设施中轻松采用。在此更新中，我们提供了进一步优化的检测条件，用于测量特定疫苗中残留的 PTx ADP-核糖基转移酶和碳水化合物结合活性。一般而言，适当稀释疫苗有助于提高检测灵敏度。加标实验表明，碳水化合物结合试验可以检测到与 HIST 类似的低水平 PTx。尽管某些疫苗的 ADP-核糖基转移酶活性测定中也显示出随着加标增加而呈正向趋势，但许多加标疫苗的结果值在统计上并不显著，这是由于未加标疫苗的基线活性较高。由于该生化检测系统的所有试剂在全球范围内均可获得、易于控制且测试一致性良好，因此两种检测方法均可用于监测产品一致性。碳水化合物结合试验甚至可以被视为 HIST 的潜在替代方案，用于批量释放无细胞百日咳疫苗。该体外检测系统的协议作为补充文件 1 和 2 提供。