生物化学与分析生物化学

抽象的

利用拉曼光谱评估双链 DNA 损伤

Auner AW 和 Thomas JC

双链 DNA 断裂 [DSB] 和后续修复可以纠正DNA损伤，但也可能错误地导致突变，从而导致细胞损伤和疾病。DSB 可以通过拉曼光谱法测量，使用由纯化 DNA 样本中不同分子振动产生的非弹性散射光。曝光时间为 20 秒，积累 2 次，拉曼分析发现环状 pBS KS+质粒DNA 振动与水空白对照相似。限制 pBS KS+ 单个 EcoR1 位点会产生线性 DNA，并且 880、1044、1084 和 1458 cm ^-1处的拉曼峰显著增加。为了进一步探索拉曼检测 DNA 损伤，在 +/- 16 μg/ml Bleocin™ 中培养人类 Jurkat 淋巴细胞。与未经处理的细胞相比，经 Bleocin ^™处理的细胞中的 DNA 在 880、1044、1084 和 1458 cm ^-1处显示出增强的拉曼吸收。 Jurkat 细胞缺乏表达促凋亡 Bax 蛋白和 p53 的能力，但 Bleocin ^™暴露可增加 TAp73 水平，从而导致细胞死亡。由于对生物材料的干扰少且灵敏度高，拉曼光谱是一种快速而简单的方法，可以比较估计相对 DSB 的程度。与需要分析活细胞和死细胞的彗星分析不同，分离的 DNA 可以从几乎任何细胞中轻松回收、储存，并在稍后进行 DSB 分析。