干细胞研究与治疗杂志

抽象的

TBK1 复制刺激正常眼压性青光眼患者 iPSC 衍生的视网膜细胞自噬

巴德·A·塔克、弗朗西斯·索利文-廷普、本·R·罗斯、克里斯汀·R·安芬森、艾伦·L·罗宾、卢克·A·威利、罗伯特·F·穆林斯和约翰·H·芬格特

TBK1 基因的重复会导致正常眼压性青光眼 (NTG)；然而，这种拷贝数变异导致视网膜神经节细胞死亡的机制尚不清楚。现在，我们能够使用皮肤来源的诱导性多能干细胞 (iPSC) 研究突变基因产物在视网膜等难以接近的组织中的功能或功能障碍，这为我们提供了体外研究疾病病理生理学的能力。iPSC 是由 TBK1 相关 NTG 患者的真皮成纤维细胞通过病毒转导转录因子 OCT4、SOX2、KLF4 和 c-MYC 生成的。视网膜祖细胞和随后的视网膜神经节细胞样神经元是使用我们之前开发的分步分化方案衍生的。通过针对 TUJ1、MAP2、THY1、NF200 和 ATOH7 的 RT-PCR 和针对 NF200 和 ATOH7 的免疫组织化学，证实了向视网膜神经节样细胞的分化。Western blot 分析表明，来自具有 TBK1 基因重复的 NTG 患者的成纤维细胞和视网膜神经节细胞样神经元的 LC3-II 蛋白水平（自噬的关键标志物）均有所增加。TBK1 的重复之前已被证明会增加 TBK1 的表达，我们在此证明相同的重复会导致 LC3-II 的激活。这表明 TBK1 相关青光眼可能是由这种分解代谢途径的失调（过度激活）引起的。