董红莲、吴海韵、赵杰、黄永文、李志、张永辉、徐雪艳
目的:研究不同时间电刺激对C2C12肌管线粒体功能的影响,进一步探讨其分子机制。方法:C2C12肌管分化后第7天给予电刺激,刺激强度为30 ms,3Hz,刺激时间分别为60 min、120 min、180 min。实验共设4个组,分别为对照组(Con)、60 min组(E60)、120 min组(E120)、180 min组(E180)。显微镜下观察肌管形态;试剂盒检测MDA、SOD、ROS;Western blot检测自噬蛋白及机制蛋白PGC1、p-ULK、SIRT1、SIRT3的表达;流式细胞术技术检测肌肉线粒体膜电位。结果:不同电刺激处理后C2C12肌管形成情况无明显差异。与对照组相比,E60组线粒体膜电位无明显差异(p>0.05),但MDA、ROS、SIRT3明显升高(p<0.05),p-ULK、PGC1明显升高(p<0.01),SIRT1明显降低(p<0.05)。E120组MDA、ROS、SIRT3、PGC1明显升高(p<0.01),SOD、线粒体膜电位明显降低(p<0.05)。E180组MDA、ROS明显升高(p<0.01),SOD、线粒体膜电位明显降低(p<0.01)。结论:适度电刺激(60和120 min)能显著激活氧化应激,进一步促进SIRT3、PGC1和p-ULK的表达,并进一步促进线粒体膜电位的升高,而过度电刺激(180 min)则产生相反的效果。