龟川春菜、黑泽绫、梅原真澄、丰田绘里子、安达则隆
随机整合是一种现象,转染的 DNA 分子通过非同源重组整合到宿主基因组(随机位点)中。尽管人们认为 DNA 双链断裂的修复会导致随机整合事件,但人们对这些内源性 DNA 损伤在活细胞中是如何产生的还知之甚少。在本研究中,我们提供了 DNA 拓扑异构酶 IIa (Top2α) 和活性氧 (ROS) 导致基因组 DNA 损伤并导致随机整合的证据。具体来说,我们使用了人类前 B 淋巴细胞系来检查细胞培养过程中细胞 Top2 表达水平和氧浓度的影响。我们发现用 Top2α siRNA 处理细胞可显著降低随机整合频率,而 Top2β 的缺失则几乎没有影响。我们还表明,与正常(21%)氧条件下的细胞相比,电穿孔后在低氧(3%)培养条件下持续培养的细胞显示出降低的随机整合频率。这些发现支持了以下观点:Top2α 蛋白和 ROS 是能够产生 DNA 损伤的内源性因素,从而导致转染 DNA 在人体细胞中随机整合。