微生物与生化技术杂志

抽象的

密码子优化的番木瓜蛋白酶序列在甲基营养酵母毕赤酵母中的表达

妮可·沃纳、托马斯·赫斯、史蒂芬·鲁普和苏珊娜·齐贝克

半胱氨酸内切蛋白酶木瓜蛋白酶是工业应用最广泛的植物蛋白酶之一。然而，从木瓜植物乳胶中分离木瓜蛋白酶的传统方法无法满足全球需求。为了增加木瓜蛋白酶在工业应用中的产量，近年来研究了几种重组表达系统。在大肠杆菌中表达会导致不溶性蛋白质的积累，而在杆状病毒/昆虫系统和酿酒酵母中表达会导致可溶性蛋白质产量低，不足以进行大规模生产。这里我们描述了合成的密码子优化的木瓜蛋​​白酶序列在毕赤酵母菌株 X33 (Mut+) 和 KM71H (Muts) 中的异源表达。重组木瓜蛋白酶可以表达为可溶性蛋白质并通过 α 因子信号肽分泌到培养基中。在复合培养基中培养时，Muts 菌株的活性最高。经 Ni-NTA 色谱纯化后，获得了 463 mg/L 重组丙木瓜蛋白酶，与迄今为止报道的蛋白质溶解和重新折叠后大肠杆菌中丙木瓜蛋白酶的最高产量相当，且其特定活性类似于木瓜乳胶中的商业木瓜蛋白酶。