生物化学与分析生物化学

抽象的

肝脏清道夫受体清除肝素

爱德华·N·哈里斯

HTS 实验室开发了一系列用于结合和信号传导的检测技术，用于鉴定作用于 GPCR 的命中化合物或先导化合物。[35S] GTPγS 结合检测仍然是一种有用且简单的技术，可用于证明受体激活，并且是少数几种功能性无细胞检测之一。然而，它的放射性使其在常规实验室实践和高通量实验中的使用受到明显限制。在此，我们开发了一种新的非放射性检测版本，使用铕标记的 GTP 类似物，其中铕-GTP 结合可使用时间分辨荧光进行检测。在我们继续努力的同时，该检测方法已针对组胺 3 受体进行了调整。通过测试已知的组胺 3 激动剂（Imetit、Immepip、Methylhistamine、Proxifan 和 Histamine）和拮抗剂（GSK189254、Clobenpropit 和 Thioperamide）药物，专门评估了检测格式。在优化的检测条件下，结合检测中的效力 (pEC50 和 PKB) 与之前在同位素功能活性检测中获得的效力非常一致。观察到 Eu-GTP 结合检测非常稳定 (Z' 因子 0.84)，且百分比高于基础计数。该检测可用作筛选级联的组成部分，用于筛选组胺 3 受体拮抗剂。