微生物与生化技术杂志

抽象的

利用蛋白质组学方法鉴定和表征兔附睾中具有抗菌活性的分子

Reddy KVR、Sukanya Deva、Clara Aranha、Mandar S. Patgaonkar 和 Gauri Bhonde

抗菌肽 (AMP) 是宿主先天免疫系统的关键成分，是宿主抵御入侵病原体的第一道防线。本研究尝试识别和表征兔附睾上皮细胞 (EPEC) 中合成的 AMP。用 TLR-9 配体 CpG-ODN-2006 体外诱导 EPEC 导致几种 AMP 上调。使用蛋白质组学方法（超滤、阳离子交换色谱法、RP-HPLC、Far Western 印迹法 - FWB、2D-PAGE 和 MALDI-TOF-MS）在混合附睾组织匀浆的酸性提取物中识别这些分子。混合 RP-HPLC 级分（峰 1-5）被命名为兔附睾分泌抗菌蛋白 (RESAMP)，对几种病原体表现出活性。 FWB、2D-PAGE 和 MALDI-TOF-MS 结果显示，在已鉴定的约 19 种蛋白质中，发现四种蛋白质序列（血红蛋白-α/β 亚基、转甲状腺素蛋白和钙网蛋白）与 HIV 抗原（gp120、gp17、gp41、p24）发生反应。四种序列之一（VLSHHFGKEFTPQVQ）与血红蛋白-β 蛋白的同源性 >90%。具有 VLSHHFGKEFTPQVQ 序列的 29 肽被指定为兔附睾血红蛋白 β (REHbβP)。合成的肽显示出最高的基于概率的 Mowse 评分 (PBMS)，并表现出良好的杀菌活性（大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌和白色念珠菌）。REHbβP 对人宫颈管细胞 (End1/E6E7) 和兔红细胞没有表现出细胞毒性。免疫荧光结果显示 REHbβP 定位于兔附睾静纤毛和射精精子的顶体。据我们所知，这是第一项描述在兔附睾中检测 AMP 的研究。总之，本研究表明 EPEC 衍生的 REHbβP 可能在人类和动物生殖健康管理方面具有治疗潜力。