干细胞研究与治疗杂志

抽象的

基于 LINE-1 的插入诱变筛选可识别参与胚胎干细胞分化的基因

Sung-Hun Lee 和 Danny Rangasamy

背景：在将胚胎干细胞用于治疗目的成为现实之前，了解胚胎干细胞的内在特性至关重要。插入诱变筛选被广泛用于识别足以赋予特定表型的基因；然而，这种方法的应用仅限于小鼠模型。因此，需要开发一种新的 DNA 转座子系统，以便在干细胞中进行基因发现。
方法：本研究旨在探索使用长散布核元件 1 (LINE -1) 逆转录转座子作为基因陷阱载体来识别参与小鼠胚胎干细胞维持和分化的基因的可能性。
结果：我们利用载体骨架中的支架/基质附着区开发了一种游离型、非病毒 LINE-1 逆转录转座子系统。该基因陷阱载体含有 GFP 标记，其表达仅在成功插入诱变后发生。通过利用该载体，结合 GFP 表达，我们成功分离了四个显示破坏基因的单个胚胎干细胞克隆，其中包括两个已知基因。然后，我们使用反向 PCR 方法确认了这些基因的身份，并使用 shRNA 和胚胎干细胞未分化标记验证了它们在细胞分化中的功能。
结论：这种插入诱变剂的使用方便，以及通过 GFP 表达识别基因破坏细胞的简单性，使这种 LINE-1 载体成为胚胎干细胞和癌症干细胞基因发现的有前途的工具。