临床与医学生物化学

抽象的

散发性乳腺癌中 RASSF1 基因甲基化及 mRNA 表达的分子分析

Maria Lagiou、Nikoleta Poumpouridou、Nikolaos Goutas、Dimitrios Vlachodimitropoulos、Aggeliki Pappa、Evi Lianidou、Triantafyllos Liloglou 和 Christos Kroupis

简介：本研究旨在验证创新且可靠的方法，用于研究 RASSF1 基因第一个启动子的 DNA 甲基化（乳腺组织中其主要转录本 RASSF1A 的转录起点）、其 mRNA 表达及其在散发性乳腺癌中的评估。材料和方法：分析了 81 例已知组织病理学数据的冷冻乳腺癌组织以及 4 例正常乳腺组织的 DNA 和 RNA。通过焦磷酸测序评估 DNA 甲基化水平，分析第一个 RASSF1 启动子的 CpG 岛中的 9 个 CpG 二核苷酸。对于 mRNA 表达，使用实时 RT-qPCR 方法，并使用合成标准、SYBR Green PCR 试剂盒和一组适用于所有 RASSF1 转录变体（G 除外）的标准化引物（Qiagen）进行验证。对于 RASSF1 表达的相对定量，使用 2-ΔCt 方法，以 β2-微球蛋白为参考基因。结果：59例RASSF1甲基化正常（72.8%），22例RASSF1高甲基化（27.2%），40例RASSF1 mRNA高表达（49.4%），41例（50.6%）RASSF1低表达。甲基化与RASSF1表达无负相关性（p=0.207）。Logistic回归分析显示，ER受体阴性（p=0.008，OR 0.09，CI 0.14-0.52）、甲基化百分比（p=0.006，OR 7.96，CI 1.82-34.86）和RASSF1表达水平（p=0.047，OR 3.94，CI 1.02-15.29）均会增加淋巴结浸润的可能性。生存分析表明，转移与 mRNA RASSF1 过表达之间存在边际统计学显著相关性（对数秩检验，p=0.040）。结论：评估的检测方法似乎为乳腺癌的临床管理提供了潜在有用的信息。未来应评估用于第二个 RASSF1 启动子甲基化的类似可靠检测方法。关于表达研究，一种针对所有不同 RASSF1 转录本的探针的新设计策略将为研究提供额外的能力，并有可能在散发性乳腺癌的临床评估中使用新的 RASSF1 生物标记物。