基因科技

抽象的

假单胞菌属地方分离株抗癌蛋白天青蛋白的分子检测与表达

Aslam F、Farooq A、Qaiser H、Bajwa S、Saleem F 和 Naz S

2000 年，天青蛋白被认定为抗癌药物，它在诱导细胞凋亡和细胞毒性方面发挥着重要作用。天青蛋白在穿透肿瘤细胞后可能与细胞质和细胞核物质结合，并稳定 p53（一种肿瘤抑制蛋白），从而有助于提高其在细胞内的水平。将来自铜绿假单胞菌的 447 bp PCR 扩增的天青蛋白片段克隆到 pTG19-T 克隆载体中。DNA 序列预测前蛋白具有 19 个氨基酸的信号肽，随后是 128 个氨基酸的成熟天青蛋白。天青蛋白基因被克隆到 pET22b 载体中。将重组 rpET22b (+)-Azu 载体克隆到 BL21-Codon Plus (DE3) 细胞中。在 37°C 下 6 小时后，在 0.5 mM 浓度的 IPTG 下获得优化的高表达天青蛋白基因。测序显示与报道的天青蛋白序列有 99.8% 的序列同源性。在第 17 个氨基酸处检测到一个静默突变，即 CCA 变为 CCG。然而，产生的氨基酸（脯氨酸）保持不变。