微生物与生化技术杂志

抽象的

嗜热真菌嗜热丝状菌几丁质酶基因在酿酒酵母中的过度表达及重组几丁质酶的鉴定

M. Prasad 和 P. Palanivelu

嗜热真菌嗜热丝状菌 ATCC 44008 的几丁质酶基因已被克隆并在酿酒酵母 SEY 2101 中过表达。重组几丁质酶以可溶性分泌蛋白的形式产生。在诱导培养基中，酶活性在第四天达到最大值，温度为 30°C。过表达的几丁质酶在 pH 6.5 和 60°C 时表现出最佳活性。重组几丁质酶在 50°C 下 6 小时后仍保持 60% 以上的酶活性，具有显著的热稳定性。通过 SDS-PAGE 测得过表达几丁质酶的分子量为 42 kDa。酶的动力学参数（如 KM 和 Vmax）分别为 0.403 mM 和 8.74 mmoles/min/mg 蛋白。葡萄糖强烈抑制重组几丁质酶的合成。诱导培养基中真核翻译抑制剂放线菌酮活性提高10%，而转录抑制剂8-氮鸟嘌呤和8-羟基喹啉抑制活性达30%。过表达的重组几丁质酶有望应用于制药工业，用于制备壳寡糖。