药物分析学报

抽象的

使用氨加合物增强选择离子监测液相色谱正电喷雾电离质谱法分析大鼠脑单酰甘油脂肪酶活性

Gary W Caldwell 和 Wensheng Lang

2-花生四烯酰甘油 (2-AG) 是中枢神经系统的主要内源性大麻素之一。通过选择性抑制脑单酰甘油脂肪酶 (MAGL) 活性来上调中枢内源性大麻素信号传导是缓解疼痛、肥胖和糖尿病等疾病的潜在治疗方法。因此，一种灵敏可靠的分析方法来确定脑内源性大麻素水平对于发现 MAGL 抑制剂至关重要。使用液相色谱正电喷雾电离质谱 (LC / +ESI / MS) 和串联质谱准确测量单酰甘油 (MAG) 水平是一项挑战，因为脑内源性大麻素不仅在研究的生命阶段容易受到压力的影响，而且容易发生死后代谢、酰基迁移（即从 2-MAG 转化为 1(3)-MAG）、金属加合离子形成和化学水解，产生与目标酶相同的产物。为了避免这些伪影，我们开发了一种简单的 LC/+ESI/MS 方法，用于在选择离子监测模式 (SIM) 下直接检测主要 MAG 的铵加合物阳离子。对于体外 MAGL 抑制试验，使用 LC 等度洗脱对 37oC 下与大鼠脑匀浆孵育期间产生的 MAG 及其酰基迁移异构体进行基线分离。为了最大限度地减少体内研究中 MAG 的死后代谢和异构化，将大鼠脑直接均质在每克脑组织四毫升乙醇中，并采用线性 LC 梯度洗脱进行广泛的内源性大麻素分析。SIM LC/+ESI/MS 方法被证明可用于体外脑部评估 MAGL 和脂肪酸酰胺水解酶 (FAAH) 抑制剂的抑制效力，以及用于体内脑部评估以进行靶向参与研究。