干细胞研究与治疗杂志

抽象的

使用简单的摇动方法从分化神经干细胞后代中纯化未成熟神经元

哈桑·阿扎里、Sharareh Sharififar、Roya P Darioosh、Maryam Rahman、Jeff M Fortin 和 Brent A Reynolds

目的：富集的神经元细胞群是实验室研究和细胞治疗应用的宝贵工具。然而，可用的细胞纯化方法需要昂贵的设备，例如 FACS 或 MACS，这限制了它们的普遍可用性。在这项研究中，我们开发了一种有效的方法，用于从分化中的神经干细胞 (dNSC) 后代中纯化未成熟的神经元细胞，该方法基于其不同的底物附着特性，而无需使用任何昂贵的细胞分离工具。方法：使用神经球测定法从胚胎第 14 天小鼠大脑的神经节隆起中收获神经干细胞。然后将神经球分离成单个细胞，并使用神经母细胞测定法进行分化。在短暂的胰蛋白酶消化后，将 dNSC 培养物以 150 rpm 的速度轻轻摇动 30 分钟，以将顶部神经元细胞簇与下面的星形胶质细胞单层分离。将神经元纯化产量、星形胶质细胞污染和分裂细胞的存在与使用 PSANCAM 抗体的 MACS 纯化方法进行比较。结果：使用 MACS 可获得 97.1 ± 0.45% 的神经元产量，而使用摇动法可获得 97.9 ± 0.6% 的神经元产量，两者没有显著差异。另一方面，MACS 方法中的星形胶质细胞百分比为 1.18 ± 0.15%，但使用摇动法则显著下降至 0.6 ± 0.15%。此外，MACS 和摇动法分离出的细胞中分别有 4.41 ± 0.23% 和 5.3 ± 0.4% 是 Ki-67 免疫反应性分裂细胞，其中 97.34 ± 1.6% 和 97.9 ± 0.7% 共同表达 β III-微管蛋白，证实了它们的神经元身份。此外，根据神经集落形成细胞测定，摇动法可产生均质的神经元细胞群，且没有任何真正的 NSC 污染。结论：振荡纯化法可以轻松、低成本、高效、大规模地从 dNSC 后代中分离未成熟神经元，这可能有利于基础和临床应用。