生物化学与分析生物化学

抽象的

使用廉价荧光增白剂在一维聚丙烯酰胺凝胶电泳上快速检测蛋白质

Sashidhar RB、Tanuja Kosuri 和 Sujata Nayak

商用织物荧光增白剂 Ranipal ^® (F-OB) 已成功用于染色天然和SDS -1D-PAGE上的蛋白质。使用二氯甲烷和水的双相溶剂系统纯化 F-OB。纯化和粗 F-OB 的 R _f值 (0.63) 在薄层色谱上相当。纯化 F-OB 的质谱表明基峰位于 414 (m/z)。发现 F-OB 的吸收和发射最大值分别为 350 nm 和 430 nm。F-OB 可以在天然凝胶上染色电泳前和电泳后蛋白质。电泳后染色很快，需要 20 分钟才能看到染色的蛋白质。另一方面，在 SDS 凝胶中，在用 F-OB 染色蛋白质之前，还需要 20 分钟来提取 SDS。发现 SDS 会干扰 F-OB 与蛋白质的结合。加载不同浓度的分子量标记物，并绘制其荧光强度与蛋白质浓度的关系图。r ²值范围为 0.965 至 0.997，表明线性良好。碳酸酐酶的检测范围为 8.0-800 ng。与用于蛋白质染色的大多数染料不同，F-OB 染色可以在槽缓冲液（2 mg/100 mL）中进行，并且也是可逆的。F-OB 可能是染色蛋白质最具成本效益的荧光染料（0.04 美元/25.0 克）。F-OB 被发现是一种简单、安全、灵敏、耗时少且经济的荧光染料，可作为聚丙烯酰胺凝胶上蛋白质染色的替代品。