基因科技

抽象的

通过改变 5ʹ 非翻译区和翻译区在大肠杆菌中表达重组人胰岛素原

Aslam F、Latif K、Waseem R、Naz S 和 Iftikhar S

信使 RNA 通过将 DNA 代码转移到转移 RNA 来启动翻译过程。一种称为 Shine-Dalgarno 序列的富含多嘌呤的序列有助于确定起始密码子的位置，Shine-Dalgarno 序列不同，因为它允许核糖体通过直接结合到该序列上而构建在 mRNA 的内部位置。翻译起始位点 5' 端的核糖体结合位点用于结合 mRNA 二级结构，RBS 和起始密码子之间的距离影响基因的翻译效率。在本研究中，我们改变核糖体结合位点和起始密码子之间的距离以获得不同的翻译表达率。为此，在 pET21a 载体中克隆了胰岛素原基因，结合位点和起始密码子之间的距离保留为 8 个核苷酸。在核糖体结合位点 (RBS) 和起始密码子之间的这种距离下，胰岛素原的表达占细胞总蛋白的 30%。当中间有 10 个核苷酸时，表达下降高达 2-4%。当 RBS 和起始密码子之间有 12 个核苷酸时，表达进一步下降高达 1-2%。由于这些尝试是随机进行的，因此通过 M 倍检查 mRNA 二级结构显示核糖体结合位点和胰岛素原基因的起始位点之间存在结合。另一种尝试是在胰岛素原基因的起始位点加入十种不同的核苷酸，使 mRNA 的二级结构不太稳定（ΔG=-5.5），这不会显著改变 BL21 密码子加细胞中胰岛素原的表达。还有其他控制蛋白质表达的因素，即代谢不稳定、mRNA 的快速降解或蛋白质的积累可能会下调 mRNA 的表达。