药物基因组学和药物蛋白质组学杂志

抽象的

通过虚拟和生化筛选，针对利什曼原虫真核翻译起始因子 4A 来选择和生化表征新型利什曼杀灭分子

约瑟·齐娜·阿卜杜尔克里姆

鉴定用于治疗利什曼病的新型小分子和活性分子是研究的重点。在这里，我们扩展了之前的计算机模拟研究和虚拟筛选，这些小分子以利什曼原虫起始因子 4A (LieIF) 为潜在药物靶点。LieIF 属于 RNA 解旋酶的 DEAD-box 家族。DEAD-box 蛋白含有高度保守的核心结构，呈哑铃状，包含两个连接域，其结构与重组
蛋白 A (RecA) 的结构同源。该核心结构赋予 ATP 依赖性 RNA 结合亲和力、RNA 依赖性 ATPase 活性和 ATP 依赖性 RNA 解旋活性。我们利用 ATPase 活性在微量滴定板中建立比色测定法，以筛选抑制 LieIF 的分子。我们筛选了数百个之前通过虚拟筛选确定的分子，以确定它们是否能够结合到 LieIF 上对酶活性很重要的位点。我们发现了一种有趣的抑制剂：6-α/β-氨基胆甾烷醇，
对于 1 μM LieIF，其 IC50 值为 150 ± 15 μM。该化合物还抑制 LieIF 的 RNA 解旋酶活性。解旋酶测定和对单个 RecA 样结构域和其他蛋白质的 ATPase 竞争实验表明，LieIF 上有多个结合位点，主要结合位点位于涉及保守 RNA 结合基序的结构域 1 上。十种已鉴定的 6-α/β-氨基胆甾烷醇化学类似物中有两种（6-α-氨基胆甾烷醇和 6-酮胆甾烷醇）对 LieIF 的 ATPase 活性表现出抑制作用。在哺乳动物 eIF4A 中也观察到了类似的抑制作用，但反应曲线不同。这三种分子均表现出抗利什曼原虫活性，可对抗利什曼原虫的鞭毛体和无鞭毛体，并且对巨噬细胞无明显毒性。这项研究是验证 LieIF 作为药物靶标的第一步。它展示了利什曼原虫和哺乳动物 eIF4A 蛋白之间的生化差异，最明显的是 ATPase 测定表明罗卡格酰胺对这两种蛋白的影响不同。总之，这项研究提供了一种有前途的利什曼杀灭分子：6-氨基胆甾烷醇，对细胞内无鞭毛体的 IC50 值低于 1 μM，毒性很小，选择性指数高于 20。6-氨基胆甾烷醇是一种有前途的抗利什曼原虫分子，值得进一步研究。