生物化学与分析生物化学

抽象的

利用突变蛋白脉冲水解检测超嗜热 Tk-RNase H2 的缓慢展开途径

岛加奈子、长尾爱、冈田淳、佐野聪和高野一文

超嗜热古菌 Thermococcus kodakarensis 的核糖核酸酶 H2（Tk-RNase H2）的展开速度非常慢。在之前的研究中，通过 25°C 下的脉冲蛋白水解分析观察到 Tk-RNase H2 展开中间体 IA-、IB-、IC- 和 ID- 状态，其中 IB- 和 IC- 状态是此蛋白质缓慢展开过程中的主要形式。在这里，我们使用突变体通过脉冲蛋白水解检查了 Tk-RNase H2 的缓慢展开途径。对于稳定变体 D7N，IA- 和 IB- 状态的寿命缩短，但 IC- 状态在 25°C 下出现得更早，表明 IC- 状态稳定。在 25°C 时，不稳定变体 L33A 中未观察到 IA 和 IB 状态，而在野生型中，这两种状态在 50°C 时消失。我们的结果表明，在较高温度下，IC 状态是 Tk-RNase H2 的真正天然状态，而在 25°C 下的天然状态、IA 和 IB 状态是较低温度下的人工形式。