植物病理学与微生物学杂志

抽象的

通过环介导等温扩增技术对水痘克雷伯氏菌和产酸克雷伯氏菌进行特异性检测

Jarred Yasuhara-Bell、Caleb Ayin、April Hatada、Yonghoon Yoo、Robert L. Schlub 和 Anne M. Alvarez

克雷伯氏菌属是机会性病原体，在临床、兽医和植物中都有分离株。先前的一项研究表明，关岛严重衰退的铁木湿材中的细菌渗出物含有青枯菌、水稻克雷伯氏菌和产酸克雷伯氏菌。在本研究中，环介导等温扩增 (LAMP) 使用针对每种生物单独设计的独特引物组，特异性地检测出水稻克雷伯氏菌和产酸克雷伯氏菌。每个 LAMP 都能特异性地检测到其目标，而对非目标细菌和阴性对照则显示阴性结果。LAMP 在接种的铁木茎组织和细菌渗出物中检测到了克雷伯氏菌。由于存在植物抑制剂，因此测试了不同的采样方案。浸泡植物组织样本以使细菌扩散到溶液中，然后煮沸，可以最佳地直接从植物样本中检测克雷伯氏菌。通过增加富集步骤（包括接种和 12 小时孵育）消除了使用粉碎植物样本时产生的假阴性。DGGE（变性梯度凝胶电泳）和使用克雷伯氏菌特异性抗体的菌落印迹免疫测定也检测到了接种的铁木中的克雷伯氏菌。来自密切相关的肠杆菌的 DGGE 谱带和抗体交叉反应显示出可能出现假阳性结果。LAMP 的性质使其成为即时检测的理想选择，并且当与本研究开发的 LAMP 引物的特异性相结合时，证明了其作为关岛铁木中克雷伯氏菌的常规现场测试以及克雷伯氏菌感染的临床和兽医诊断的潜力。此外，本研究中检测的目标区域可应用于所有形式的分子诊断。