植物病理学与微生物学杂志

抽象的

荧光相关光谱法（FCS）证明Ca2+依赖性蛋白激酶与马铃薯晚疫病病原菌抑制因子结合可抑制马铃薯细胞中的NADPH氧化酶和活性氧生成

古市直隆、太田正敏、冈村久一、堀込通吉、横川一俊

据报道，作为植物细胞过敏性细胞死亡抑制剂的代表，来自疫霉菌 (Pi) 的葡聚糖可抑制植物抗毒素的积累和过敏性细胞死亡。为了评估 Pi 抑制剂结合后钙依赖性蛋白激酶 (CDPK) 的激活情况，将荧光相关光谱 (FCS) 应用于单个 GFP-CDPK 和 Alexa 标记的抑制剂。我们构建了嵌合蛋白，串联融合的绿色 FP (GFP)-CDPK 和抑制剂与 Alexa 633 标记的抑制剂抗体 (Abs)。双色 FCS 提供了有关单分子水平上两个荧光分子光谱重合的信息。我们在此报告，对于马铃薯 NADPH 氧化酶的抑制，抑制剂与 CDPK 肽（激酶结构域 I 和 III 肽）结合，在凝胶激酶测定中 CDPK 磷酸化了 NADPH 氧化酶，并且抑制剂抑制了 NADPH 氧化酶产生活性氧。这意味着来自植物病原体的 HR 抑制抑制剂通过 CDPK 的磷酸化信号控制植物细胞中超氧化物自由基的形成。