生物分子研究与治疗杂志

抽象的

色谱柱同时纯化人FVIII/vWF和病毒灭活

Sergiy P Havryliuk、Ievgenia M Krasnobryzha、Olena S Havryliuk 和 Georgii L Volkov

众所周知，自由度的减少可防止蛋白质变性。在之前的研究中，我们表明色谱凝胶结合蛋白可作为减少蛋白质自由度的剂。此外，新开发的凝胶的高动态容量可在色谱过程的高温下提供对肽/蛋白质的令人满意的保留。这两个因素允许在目标分离过程中直接在色谱柱中对肽（链激酶片段 SK1-61）和低（牛奶溶菌酶）和平均（蛇毒中的纤维蛋白原溶解酶）分子量蛋白质进行病毒灭活。本研究的目的是调查在色谱柱中直接进行病毒灭活时，保留离子交换和亲和凝胶结合的高分子量复合物 FVIII/vWF 活性的可能性。另一个目标是表明结合蛋白吸附剂可作为可靠的“筛子”，用于机械清洗感染病毒。使用各种色谱法、光度法、RT-PCR 方法发现，高动态容量（决定吸附剂的高温度依赖性容量）允许在 40-50°C 的温度下在色谱柱中通过溶剂/洗涤剂处理在 3-5 小时的长时间内直接进行病毒灭活复合物 FVIII/vWF。FVIII 生物活性被完全保留；包膜病毒和非包膜病毒被有效去除。模拟病毒消除水平足以完全灭活病毒，因此我们推荐将此方法用于制药行业。