干细胞研究与治疗杂志

抽象的

大鼠间充质干细胞向多巴胺能神经元的转分化及其细胞移植

Ryan M Welchko、Travis D Hulse、Sabrina S Dieffenbach、Gabrielle P Shall、Huo Wangjing、Leslie R Siegal、Jared R Watters、Leveque T Xavier、Ming Lu、Julien Rossignol、Michael I Sandstrom 和 Gary L Dunbar

目的：将人类胚胎多巴胺能祖细胞移植到 PD 患者的纹状体中取得了令人鼓舞的结果，但伦理问题和组织可用性限制了这种方法。间充质干细胞 (MSC) 的使用提供了一种现成的细胞来源，因为它们来源于成人组织。这项体外研究探索了使用 MSC 作为细胞来源，利用单一腺病毒进行 DA 神经元诱导。
方法：我们的实验室开发了一种新型腺病毒，该腺病毒表达多个病毒 2A 基因，允许多顺反子表达多个基因（Ascl1、Lmx1a 和 Nurr1），这些基因是参与 DA 神经元分化的转录因子，并使用绿色荧光蛋白 (gfp) 基因来跟踪转染。MSC 与腺病毒一起培养，监测形态变化以及荧光显微镜所证实的 gfp 表达。通过 PCR、免疫细胞化学和 RTPCR 确认转染细胞中存在病毒 DNA。
结果：用腺病毒培养的 MSCs 导致形态学变化以及荧光显微镜下 gfp 的表达。用 PCR 确认转染细胞中存在病毒 DNA。免疫细胞化学和 RT-PCR 分析表明，表达 gfp 的细胞具有翻译转录因子 LMX1a 和 NURR1 的核共标记，以及这些基因的上调，以及下游基因靶标的上调，例如酪氨酸羟化酶 (TH) 和多巴胺转运体 (DAT)。